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Mientras trabaja bajo tierra para arreglar una tubería de agua, los plomeros de Brooklyn Mario y su hermano Luigi son transportados por una misteriosa tubería y llegan a un nuevo mundo mágico. Pero cuando los hermanos se separan, Mario se embarca en una búsqueda épica para encontrar a Luigi. Con la ayuda de un residente del Reino Champiñón, Toad y algo de entrenamiento de la gobernante del Reino Champiñón, la Princesa Peach, Mario conocerá su propio poder.
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En una alegre urbanización con cuidados jardines rodeados por verjas de madera pintadas de blanco y llenos de rosales, sobresale una casa negra con el césped amarillento. Los vecinos ignoran que debajo de la vivienda hay un enorme escondite secreto. Allí está Gru, rodeado por un pequeño ejército de lacayos, planeando el mayor robo de toda la historia. ¡Va a hacerse con la luna!
